胆固醇氧化酶法的线性范围小于19.38mmol/L(mg/d1)。胆固醇氧化酶法特异性非常好，灵敏度高。不仅可以用于手工操作，而且也可自动化分析。它既可为作终点法检测，也能够当做速率法检测。在终点法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小，通常高TG血症对该方法没有很明显的影响。
胆固醇氧化酶血清中总胆固醇可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸,胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中血清总胆固醇（TC）含量成正比。一般来说，检测TC的血清标本可在4℃下密封保存可稳定一周，零下20℃密封保存至少可稳定半年。
至于在临床上，测定TC意义重大。有助于更好地了解健康状况，TC含量的增高多见于原发性高脂血症，动脉粥样硬化、肾病综合征、尿病糖等等疾病。TC含量的降低常见于营养不良、贫血、败血症、低脂蛋白血症、肝脏疾病等等。